临床肝胆病杂志

基金项目: 

科技部“十二五”艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治项目子课题(2013ZX10004609-004)； 吉林省发展与改革委员会项目(2014N147)； 

目的建立外周血单个抗体分泌细胞分离和单个细胞RT-PCR系统,高效快速克隆高度特异性、全人源性的HBV单克隆抗体。方法选择3例HBV感染恢复期患者,从外周血中富集B淋巴细胞,加入HBcAg Peptide pool活化B淋巴细胞,流式分选出记忆性抗体分泌细胞（CD19+CD10-IgG+CD27+）,通过有限稀释法获得单个细胞,单细胞RT-PCR反转出cDNA,巢式PCR扩增抗体重链恒定区序列片段,将PCR产物纯化并克隆至pEASY-T1 simple克隆载体,进行测序鉴定。结果 ELISA结果显示,3例HBV感染恢复期患者血浆中均检测到较高水平IgG,与健康志愿者相比,差异均有统计学意义（P值均<0.05）。流式结果显示,B淋巴细胞比例均高于94%,且均可分离出记忆性抗体分泌细胞。从分离的抗体分泌细胞中挑选出24个含有1个形态完好的细胞,经鉴定,其中有14个扩增成功,且条带在200 bp左右,与预期片段大小相符。对抗体重链序列分析显示成功扩增出抗体恒定区片段。结论成功...

来源：2016年第12期

《临床肝胆病》期刊编辑部

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