国内刊号：22-1108/R
国际刊号：1001-5256
发布日期:
作者：周辉芳, 隗和儒, 马士朝, 张超群, 王君平, 杨新英, 谢英, 孙殿兴
单位：1.河北医科大学研究生学院2.中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院全军肝病中心3.承德医学院4.河北医科大学实验动物学部河北省实验动物重点实验室
关键词：胶原三股螺旋重复蛋白1, 质粒, 细胞系,肿瘤, 微RNAs
基金： 基金项目: 国家自然科学基金资助项目(30571667)； 河北省科技支撑计划项目(15967777D)； 目的构建pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,初步探讨胶原三股螺旋重复蛋白1基因（CTHRC1）与microRNA（简写为miR）-30b的关系。方法设计特异性引物,通过PCR扩增合成含有CTHRC1 CDS+3’UTR区的序列,并克隆至p IRES2-EGFP真核表达载体,得到p CTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体。采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切电泳和测序法进行鉴定;通过脂质体转染法转染Huh7及HepG2细胞评价转染效率;将miR-30b mimic、control、pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒和pIRES2-EGFP质粒转染至293T细胞中,分别采用Western Blot和实时荧光定量PCR法检测转染48 h后CTHRC1蛋白的表达水平及miR-30b的表达水平,初步探讨CTHRC1基因与miR-30b的关系。两组间比较采用独立样本t检验。结果采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,得到5300 bp和1100 bp两条片段,与预期结果一致,测序结果也显示序列与GeneBank公布序列完全一致,表明p CT... 来源：2020年第2期 《临床肝胆病》期刊编辑部 查看临床肝胆病杂志2020年第2期
国家自然科学基金资助项目(30571667)； 河北省科技支撑计划项目(15967777D)；
目的构建pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,初步探讨胶原三股螺旋重复蛋白1基因（CTHRC1）与microRNA（简写为miR）-30b的关系。方法设计特异性引物,通过PCR扩增合成含有CTHRC1 CDS+3’UTR区的序列,并克隆至p IRES2-EGFP真核表达载体,得到p CTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体。采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切电泳和测序法进行鉴定;通过脂质体转染法转染Huh7及HepG2细胞评价转染效率;将miR-30b mimic、control、pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒和pIRES2-EGFP质粒转染至293T细胞中,分别采用Western Blot和实时荧光定量PCR法检测转染48 h后CTHRC1蛋白的表达水平及miR-30b的表达水平,初步探讨CTHRC1基因与miR-30b的关系。两组间比较采用独立样本t检验。结果采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,得到5300 bp和1100 bp两条片段,与预期结果一致,测序结果也显示序列与GeneBank公布序列完全一致,表明p CT...
来源：2020年第2期
《临床肝胆病》期刊编辑部
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