临床肝胆病杂志

基金项目: 

国家自然科学基金青年科学基金项目 (81800524)

  目的  探讨STAT3在对乙酰氨基酚(APAP)致小鼠肝细胞损伤后肝细胞增殖中的作用。  方法  体外培养小鼠正常肝细胞AML12，APAP(1、2.5、5、10、20 mmol/L)刺激12、24或48 h，等体积PBS作为对照组。筛选出最佳刺激浓度和作用时间后，AG490(10、50、100 μmol/L)作用AML12。CCK8法检测AML12细胞活力。RT-PCR检测AML12中PCNA、CyclinD1、Ki67的mRNA表达水平。Western Blot法检测STAT3、p-STAT3及PCNA、CyclinD1表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  APAP作用24 h及48 h后，与对照组比较，各浓度组AML12细胞活力均降低(P值均 < 0.05)；APAP浓度为2.5 mmol/L时，细胞活力分别为0.717±0.027、0.752±0.014，与对照组比较差异均有统计学意义(P值均 < 0.05)，能够满足后续实验条件。与对照组比较，24 h APAP(2.5 mmol/L)组PCNA、CyclinD1及Ki67 mRNA的表达均降低(P值均 < 0.01)；与24 h APAP组比较，48 h APAP(2.5 mmol/L)组PCNA、CyclinD1及Ki67 mRNA的表达均升高(P < 0.01)，因此选择APAP 2.5 mmol/L、刺激时间48 h来模拟体外损伤AML12细胞后肝细胞再生的模型。加入AG490，与对照组比较，10、50 μmol/L AG490组细胞活力变化无统计学意义，余各组细胞活力均降低(P值均 < 0.01)；与APAP组比较，AG490(50 μmol/L)+APAP组和AG490(100 μmol/L)+APAP组细胞活力降低(P值均 < 0.01)，因此选择50 μmol/L AG490作为后续实验处理浓度。与对照组比较，APAP组p-STAT3的蛋白水平升高(P < 0.01)，而AG490组、APAP+AG490组降低(P值均 < 0.05)；与APAP组比较，APAP+AG490组PCNA、CyclinD1蛋白水平及PCNA、CyclinD1、Ki67 mRNA表达均降低(P值均 < 0.05)。  结论  STAT3参与APAP诱导小鼠肝细胞损伤后的细胞增殖，而AG490作为STAT3抑制剂通过抑制STAT3磷酸化从而抑制APAP肝损伤后肝细胞增殖。

来源：2021年第4期

《临床肝胆病》期刊编辑部

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