国内刊号：22-1108/R
国际刊号：1001-5256
发布日期:
作者：于维凯, 冯婷婷, 陈晓兵, 骆继业, 冯万文, 王言理
单位：1.连云港市第一人民医院急诊内科，江苏连云港2220002.连云港市市立东方医院骨科，江苏连云港222042
关键词：癌, 肝细胞, DNA, 环状, 细胞生理学现象
基金： 基金项目: 江苏省第四期“333工程”培养资金资助项目 (201412) 目的 探究环状RNA(circRNA)hsa_circ_0091579在肝细胞癌(HCC)细胞系中的表达及其对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2和人正常肝细胞系HL-7702。从细胞中提取RNA，用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa_circ_0091579在HCC细胞系及人正常肝细胞系中的表达，并进行对比。针对hsa_circ_0091579的环化拼接位点设计siRNA，在体外HepG2和HuH-7细胞中转染hsa_circ_0091579 siRNA，并用qRT-PCR验证其有效性。实验分为siRNA组(hsa_circ_0091579 siRNA)和NC组(negative control siRNA)，并在HepG2和HuH-7细胞中用CCK8实验、流式细胞术、划痕实验以及Transwell实验分别研究hsa_circ_0091579对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。使用双荧光素酶报告基因实验对预测的靶点进行验证。计量资料两组间比较采用t检验。 结果 与hsa_circ_0091579在人正常肝细胞系HL-7702中的表达水平相比，其在HCC细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2中的表达水平均明显升高(t值分别为14.27、36.34、26.70、36.16，P值均 < 0.001)。与NC组相比，hsa_circ_0091579 siRNA可在HepG2和HuH-7细胞中有效沉默hsa_circ_0091579(t值分别为14.22、27.20，P值分别为0.005、0.001)。CCK8实验和流式细胞术结果显示，与NC组相比，siRNA组HepG2和HuH-7细胞的增殖活性明显降低，凋亡率明显升高，差异均有统计学意义(P值均 < 0.05)；划痕实验和Transwell实验显示，与NC组相比，siRNA组HepG2和HuH-7细胞的迁移和侵袭能力明显减弱(t值分别为19.63、13.61、20.75、18.45，P值分别为0.003、0.005、0.002、0.003)。荧光素酶报告基因实验结果显示，与NC组相比，miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p均能明显降低野生型荧光素酶质粒的活性(t值分别为10.01、9.13、61.49，P值分别为0.010、0.012、 < 0.001)。 结论 hsa_circ_0091579在HCC细胞系中高表达，可能通过抑制miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p发挥其癌基因的作用。 来源：2021年第5期 《临床肝胆病》期刊编辑部 查看临床肝胆病杂志2021年第5期
江苏省第四期“333工程”培养资金资助项目 (201412)
目的 探究环状RNA(circRNA)hsa_circ_0091579在肝细胞癌(HCC)细胞系中的表达及其对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法 体外培养人肝癌细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2和人正常肝细胞系HL-7702。从细胞中提取RNA，用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa_circ_0091579在HCC细胞系及人正常肝细胞系中的表达，并进行对比。针对hsa_circ_0091579的环化拼接位点设计siRNA，在体外HepG2和HuH-7细胞中转染hsa_circ_0091579 siRNA，并用qRT-PCR验证其有效性。实验分为siRNA组(hsa_circ_0091579 siRNA)和NC组(negative control siRNA)，并在HepG2和HuH-7细胞中用CCK8实验、流式细胞术、划痕实验以及Transwell实验分别研究hsa_circ_0091579对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。使用双荧光素酶报告基因实验对预测的靶点进行验证。计量资料两组间比较采用t检验。 结果 与hsa_circ_0091579在人正常肝细胞系HL-7702中的表达水平相比，其在HCC细胞系SMMC-7721、HuH-7、MHCC-97H、HepG2中的表达水平均明显升高(t值分别为14.27、36.34、26.70、36.16，P值均 < 0.001)。与NC组相比，hsa_circ_0091579 siRNA可在HepG2和HuH-7细胞中有效沉默hsa_circ_0091579(t值分别为14.22、27.20，P值分别为0.005、0.001)。CCK8实验和流式细胞术结果显示，与NC组相比，siRNA组HepG2和HuH-7细胞的增殖活性明显降低，凋亡率明显升高，差异均有统计学意义(P值均 < 0.05)；划痕实验和Transwell实验显示，与NC组相比，siRNA组HepG2和HuH-7细胞的迁移和侵袭能力明显减弱(t值分别为19.63、13.61、20.75、18.45，P值分别为0.003、0.005、0.002、0.003)。荧光素酶报告基因实验结果显示，与NC组相比，miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p均能明显降低野生型荧光素酶质粒的活性(t值分别为10.01、9.13、61.49，P值分别为0.010、0.012、 < 0.001)。 结论 hsa_circ_0091579在HCC细胞系中高表达，可能通过抑制miR-149、miR-490-5p和miR-502-5p发挥其癌基因的作用。
来源：2021年第5期
《临床肝胆病》期刊编辑部
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