临床肝胆病杂志

基金项目: 

国家自然科学基金重点项目 (81530101)

  目的  探讨虫草多糖对肝细胞凋亡的影响和作用机制。  方法  以人正常肝细胞L02作为研究对象，将不经任何药物处理的人正常肝细胞L02作为正常组；利用不同浓度的TNFα(5、10、20、40 ng/ml)进行干预24 h后筛选肝细胞凋亡模型的造模条件并作为模型组；根据实验设计，使用3种不同浓度的虫草多糖(50、100、200 μg/ml)预作用12 h后给予或者不给予筛选后的TNFα模型浓度24 h作为实验组，收取样本进行检测，采用CCK8法检测细胞增殖活力；采用Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡数；采用RT-PCR法检测细胞凋亡(Bax、caspase3、caspase8、caspase9、死亡受体Fas)的mRNA表达；采用蛋白免疫印迹法检测cleaved-caspase3、cleaved-caspase8蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis H检验，进一步两两比较采用LSD-t检验或Dunnett-t检验。  结果  CCK8法检测结果显示，40 ng/ml的TNFα诱导L02肝细胞24 h后，L02肝细胞增殖较正常组显著降低(73.54%±14.19% vs 100.00%±23.61%，P＜0.01)，3种不同浓度的虫草多糖在对肝细胞无明显细胞毒性的前提下，较模型组(93.02%±7.21%)，细胞增殖均显著升高(P值均＜0.01)，分别为108.10%±9.05%、114.30%±8.79%、117.70%±9.66%。Annexin V/PI双染法检测结果显示，与正常组细胞凋亡数量比较，模型组细胞凋亡数量显著升高(7.71%±1.20% vs 11.57%±1.41%，P＜0.05)，3种不同浓度的虫草多糖较模型组(18.91%±0.80%)均明显降低细胞凋亡数量，分别为15.16%±0.16%、13.28%±1.57%、16.91%±0.21%(P值均＜0.05)。RT-PCR法和蛋白免疫印迹检测结果显示，40 ng/ml TNFα造模后细胞凋亡相关的Bax、死亡受体Fas的mRNA表达较正常组均增强，差异均有统计学意义(P值均＜0.05)，并且激活形式的cleaved-caspase3、cleaved-caspase8的蛋白表达显著增强(P值均＜0.05)，与模型组比较，50 μg/ml的虫草多糖可显著降低Bax、caspase3、caspase9的mRNA表达和cleaved-caspase8蛋白表达，100 μg/ml的虫草多糖可显著降低Bax、caspase3、caspase8、Fas、caspase9 mRNA和cleaved-caspase8蛋白表达，200 μg/ml的虫草多糖可显著降低caspase3、caspase8、Fas、caspase9 mRNA和cleaved-caspase3、cleaved-caspase8蛋白表达，3种虫草多糖浓度作用具有一定量效趋势。  结论  虫草多糖可以有效抑制TNFα诱导的L02正常肝细胞凋亡。

来源：2021年第6期

《临床肝胆病》期刊编辑部

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