国内刊号：22-1108/R
国际刊号：1001-5256
发布日期:
作者：任婷玉, 聂赫中容, 肖利佳, 林芳楠, 王大明, 宋春丽, 周义文
单位：1.南方医科大学深圳医院检验科，广东深圳5180002.吉林大学第一医院基因诊断中心，长春130012
关键词：乙型肝炎, 肝硬化, 肝星状细胞, HBx蛋白
基金： 基金项目: 国家自然科学基金面上项目 (81974457); 国家自然 目的 探讨HBV感染对肝星状细胞(HSC)活化的影响及作用机制。 方法 收集2020年11月—2021年1月慢性乙型肝炎患者血浆30份、乙型肝炎肝硬化患者血浆42份、肝细胞癌患者血浆30份及健康体检者(健康对照组)的血浆18份，ELISA法检测血浆和条件培养液中HBx、TGFβ1、多巴胺β羟化酶(DBH)和羟脯氨酸(Hyp)的含量。采用LO2细胞构建过表达HBx稳转株细胞, LO2细胞分为LO2-HBx组(稳定表达HBx)、阴性对照组(LO2-con)、空白组，分别制备LO2-HBx、LO2-con和LO2细胞(Mock)的条件培养基，孵育人HSC株LX-2，分为LX-2/LO2-HBx、LX-2/LO2-con、LX-2/Mock 3组，采用CCK-8法检测各组细胞增殖变化。采用rhTGFβ1刺激LX-2细胞，另采用TGFβ1受体抑制剂处理LX-2/LO2-HBx组细胞。荧光定量PCR或Western Blot法检测LO2细胞中的HBx及上述LX-2细胞中α-SMA、Col1A1、DBH和TGFβ1的表达。多组间比较采用单因素方差分析，进一步比较方法采用Bonferroni法；2组间比较采用t检验；相关性分析采用Pearson法。 结果 LO2-HBx可稳定表达HBx蛋白，其培养上清中TGFβ1含量升高(F=324.701，P＜0.01)；共培养LX-2/LO2-HBx组细胞发生明显细胞形态变化，出现细胞收缩，胞突明显伸长，胞内脂滴减少，与LX-2/LO2-con组比较其增殖活力明显增强(P＜0.05)，且α-SMA和Col1A1的mRNA(F值分别为144.712和76.680，P值均＜0.01)及蛋白(F值分别为234.142和528.708，P值均＜0.001)表达水平升高；LX-2/LO2-HBx组细胞中TGFβ1 mRNA(F=29.382, P＜0.01)及DBH mRNA水平升高(F=42.662, P＜0.01)。随着rhTGFβ1刺激浓度的增加，LX-2细胞中α-SMA(F=1 794.031，P＜0.01)、Col1A1(F=91.340，P＜0.01)及DBH(F=2 501.011，P＜0.01)表达增加，在rhTGFβ1 10 ng/ml时达到峰值。在LO2-HBx组条件培养液中加入TGFβ1受体抑制剂后LX-2细胞中DBH和Col1A1的表达较对照组下调(t值分别为3.603、5.798，P值均＜0.05)。慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝细胞癌患者的血浆TGFβ1(F=51.188，P＜0.001)、HBx(F=39.227，P＜0.001)、DBH(F=34.431，P＜0.001)及Hyp(F=16.211，P＜0.001)较健康对照组升高，血浆中HBx与TGFβ1、TGFβ1与DBH、Hyp与DBH的表达量呈正相关，r分别为0.931、0.863、0.765(P值均＜0.001)。 结论 HBx蛋白可促进LO2细胞分泌TGFβ1，诱导LX-2的增殖和活化，促进肝纤维化的发生，并上调LX-2细胞中TGFβ1及DBH的表达；rhTGFβ1刺激可诱导LX-2活化和DBH表达上调。 来源：2021年第7期 《临床肝胆病》期刊编辑部 查看临床肝胆病杂志2021年第7期
国家自然科学基金面上项目 (81974457);
国家自然
目的 探讨HBV感染对肝星状细胞(HSC)活化的影响及作用机制。 方法 收集2020年11月—2021年1月慢性乙型肝炎患者血浆30份、乙型肝炎肝硬化患者血浆42份、肝细胞癌患者血浆30份及健康体检者(健康对照组)的血浆18份，ELISA法检测血浆和条件培养液中HBx、TGFβ1、多巴胺β羟化酶(DBH)和羟脯氨酸(Hyp)的含量。采用LO2细胞构建过表达HBx稳转株细胞, LO2细胞分为LO2-HBx组(稳定表达HBx)、阴性对照组(LO2-con)、空白组，分别制备LO2-HBx、LO2-con和LO2细胞(Mock)的条件培养基，孵育人HSC株LX-2，分为LX-2/LO2-HBx、LX-2/LO2-con、LX-2/Mock 3组，采用CCK-8法检测各组细胞增殖变化。采用rhTGFβ1刺激LX-2细胞，另采用TGFβ1受体抑制剂处理LX-2/LO2-HBx组细胞。荧光定量PCR或Western Blot法检测LO2细胞中的HBx及上述LX-2细胞中α-SMA、Col1A1、DBH和TGFβ1的表达。多组间比较采用单因素方差分析，进一步比较方法采用Bonferroni法；2组间比较采用t检验；相关性分析采用Pearson法。 结果 LO2-HBx可稳定表达HBx蛋白，其培养上清中TGFβ1含量升高(F=324.701，P＜0.01)；共培养LX-2/LO2-HBx组细胞发生明显细胞形态变化，出现细胞收缩，胞突明显伸长，胞内脂滴减少，与LX-2/LO2-con组比较其增殖活力明显增强(P＜0.05)，且α-SMA和Col1A1的mRNA(F值分别为144.712和76.680，P值均＜0.01)及蛋白(F值分别为234.142和528.708，P值均＜0.001)表达水平升高；LX-2/LO2-HBx组细胞中TGFβ1 mRNA(F=29.382, P＜0.01)及DBH mRNA水平升高(F=42.662, P＜0.01)。随着rhTGFβ1刺激浓度的增加，LX-2细胞中α-SMA(F=1 794.031，P＜0.01)、Col1A1(F=91.340，P＜0.01)及DBH(F=2 501.011，P＜0.01)表达增加，在rhTGFβ1 10 ng/ml时达到峰值。在LO2-HBx组条件培养液中加入TGFβ1受体抑制剂后LX-2细胞中DBH和Col1A1的表达较对照组下调(t值分别为3.603、5.798，P值均＜0.05)。慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝细胞癌患者的血浆TGFβ1(F=51.188，P＜0.001)、HBx(F=39.227，P＜0.001)、DBH(F=34.431，P＜0.001)及Hyp(F=16.211，P＜0.001)较健康对照组升高，血浆中HBx与TGFβ1、TGFβ1与DBH、Hyp与DBH的表达量呈正相关，r分别为0.931、0.863、0.765(P值均＜0.001)。 结论 HBx蛋白可促进LO2细胞分泌TGFβ1，诱导LX-2的增殖和活化，促进肝纤维化的发生，并上调LX-2细胞中TGFβ1及DBH的表达；rhTGFβ1刺激可诱导LX-2活化和DBH表达上调。
来源：2021年第7期
《临床肝胆病》期刊编辑部
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