临床肝胆病杂志

基金项目: 

国家自然科学基金 (81770611);

国家自然科学基金

  目的  建立一种用于检测HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的微滴数字PCR(ddPCR)方法。  方法  构建HBV cccDNA标准品，利用HBV cccDNA和松弛环状DNA(rcDNA)在结构上存在的差异，设计HBV cccDNA引物和探针，通过扩增HBV质粒得到HBV cccDNA标准品，把梯度稀释后的标准品作为HBV cccDNA检测的模板，建立ddPCR检测方法，并分析此方法的检出限和重复性；收集2017年6月—2020年10月在首都医科大学附属北京佑安医院就诊的20例临床患者的肝组织样本，均诊断为HBV感染，提取样本的DNA，利用质粒安全性ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切，得到HBV cccDNA模板，对ddPCR检测方法进行临床样本的评价，并与实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法作对比。计数资料两组间比较采用χ2检验。  结果  建立了基于ddPCR的HBV cccDNA检测方法，梯度稀释的HBV cccDNA标准品均能准确检出，检出限为1拷贝/μl，其中1×103、1×102、1×101拷贝/μl标准品的变异系数分别为4.41%、3.98%、5.09%；检测20例临床HBV患者样本的HBV cccDNA，ddPCR检测方法能检出17例，阳性率为85%，qPCR检测方法能检出11例，阳性率为55%，两组比较差异有统计学意义(χ2=4.286，P=0.038)。  结论  建立的ddPCR检测HBV cccDNA方法具有较低的检出限和较好的重复性，为进一步的临床检测提供了有效的工具。

来源：2021年第8期

《临床肝胆病》期刊编辑部

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