临床肝胆病杂志

基金项目: 

国家自然科学基金 (81170395);

国家自然科学基金

  目的  探讨成体人肝源性干细胞外泌体(HLSC-exo)不同时间静脉注射对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。  方法  差速离心法提取HLSC-exo，Western blot检测其标志蛋白CD9、CD63的表达，纳米颗粒跟踪分析粒径分布。将56只C57BL/6雄性小鼠随机分为3组，空白对照组、ConA模型组和HLSC-exo治疗组。根据给予磷酸盐缓冲液或HLSC-exo后再注射ConA间隔时间不同，分为3 h、6 h、12 h亚组；检测血清中ALT、AST、TNFα、IL-10水平；比较各组小鼠肝脏大体形态及病理组织变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  HLSC-exo是直径为90~110 nm的囊泡体，电镜下可见清晰的“茶托样”结构，其特异性标志蛋白CD9和CD63均有明显的表达；空白对照组小鼠ALT、AST水平分别为(31.81±6.74)U/L、(69.75±8.30)U/L。相较于空白对照组，ConA 3 h、6 h、12 h模型组小鼠ALT、AST水平明显升高(P值均＜0.001)；HLSC-exo 3 h、6 h治疗组ALT、AST水平较ConA 3 h、6 h模型组明显下降[(225.58±115.59)U/L vs (1989.32±347.67)U/L、(1174.71±203.30)U/L vs (2208.33±349.96)U/L，(303.53±126.68)U/L vs (2534.27±644.72)U/L、(1340.70±262.56)U/L vs (2437.13±288.13)U/L，P值均＜0.001]；与HLSC-exo 6 h治疗组相比，HLSC-exo 3 h治疗组下降更明显(P＜0.001)。空白对照组小鼠IL-10、TNFα水平分别为(313.51±10.97)pg/mL，(476.05±7.31)pg/mL。相较于空白对照组，ConA3 h、6 h、12 h模型组IL-10水平均明显下降(P值均＜0.001)；HLSC-exo 3 h、6 h治疗组IL-10水平相较于ConA 3 h、6 h模型组明显升高[(331.61±10.46)pg/mL vs (266.20±8.15)pg/mL、(288.13±10.74)pg/mL vs (264.41±9.12)pg/mL，P值均＜0.001]；且与HLSC-exo 6 h治疗组相比，HLSC-exo 3 h治疗组升高更明显(P＜0.001)。相较于空白对照组，ConA 3 h、6 h、12 h模型组TNFα水平较正常组明显升高(P值均＜0.001)；HLSC-exo 3 h、6 h治疗组TNFα水平相较于ConA 3 h、6 h模型组明显下降[(478.26±12.99)pg/mL vs (551.31±17.70)pg/mL、(515.58±7.18)pg/mL vs (556.21±11.15)pg/mL，P值均＜0.001]；且与HLSC-exo 6 h治疗组相比，HLSC-exo 3 h治疗组下降更明显(P＜0.001)。小鼠肝脏大体形态及病理显示HLSC-exo 3 h、6 h治疗组肝细胞坏死程度较ConA 3 h、6 h模型组明显减轻，HLSC-exo 3 h治疗组肝小叶结构基本完整，仅可见散在点状坏死；HLSC-exo 12 h治疗组与ConA 12 h模型组相比，肝细胞坏死无明显改善。  结论  成体人肝源性干细胞外泌体静脉注射可以减轻ConA诱导的小鼠急性肝损伤，以提前3 h注射保护作用最显著。通过调控细胞因子是HLSC-exo减轻肝损伤的重要机制之一。

来源：2022年第5期

《临床肝胆病》期刊编辑部

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