临床肝胆病杂志

基金项目: 

陕西省重点研发计划 (2021SF-227);

中央高校基

  目的  探讨咖啡酸苯乙酯(CAPE)对大鼠肝星状细胞(HSC)-T6的作用及作用机制。  方法  不同浓度CAPE(5、10、15 μmol/L) 分别作用于HSC-T6细胞，同时构建GFP-LC3质粒转染至HSC-T6细胞，自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-Methyladenine(3-MA)进行干预，采用MTT方法检测CAPE对HSC-T6细胞增殖的影响，透射电镜观察CAPE对HSC-T6细胞超微结构的影响，细胞免疫荧光实验检测CAPE对HSC-T6细胞LC3表达的影响，qRT-PCR检测自噬相关基因ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1和LC3 mRNA的表达情况，Western-Blot检测ATG7、Beclin1、LC3I/Ⅱ、p-AKT/AKT、p-mTOR蛋白的表达情况。计量资料组间比较采用单因素方差分析及Dunnett-t检验。  结果  CAPE干预组较对照组可抑制HSC-T6细胞增殖，且生长明显受到抑制，细胞质中可观察到脂滴和轮盘状自噬体散在分布。与对照组(13.34%±2.59%)相比，不同浓度CAPE 5 μmol/L (23.68%±3.76%，t=-5.553，P＜0.001)、10 μmol/L(43.47%±3.83%，t=-15.958，P＜0.001)、15 μmol/L(57.25%±2.78%，t=-28.334，P＜0.001)的LC3荧光染色均显著增强，且呈正相关。CAPE干预组(10、15 μmol/L)ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1和LC3 mRNA水平明显增加(P值均＜0.05)。GFP-LC3质粒转染至HSC-T6细胞后，CAPE干预组(79.01%±6.69%)较对照组(67.06%±6.74%)LC3荧光染色明显增强(t=-3.083，P=0.012)；同时给予自噬诱导剂雷帕霉素(86.88%±5.42%)，LC3表达较CAPE组明显增强(t=-2.239，P=0.049)；而给予自噬抑制剂3-MA(71.22%±4.29%)，其表达则明显减低(t=-2.404，P=0.037)；CAPE干预组和诱导剂雷帕霉素组ATG7、Beclin1和LC3 I/Ⅱ的蛋白表达水平增加，AKT/p-AKT、p-mTOR蛋白的表达水平降低；而抑制剂3-MA组则得出相反的结果。  结论  CAPE可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导自噬形成，进而抑制HSC-T6细胞增殖。

来源：2022年第10期

《临床肝胆病》期刊编辑部

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